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血清分离实验哪能少的了它

发布时间:2021-3-31 18:30:55      点击:

  离心机被广泛应用于血清分离实验。

  血清蛋白主要由清蛋白和球蛋白组成,各行使其重要的功能。

bet36最新备用平台-bet36备用主页-bet360手机版  血液完全凝固和离心条件是至关重要的两个环节,离心要求采用水平式离心机。具体操作步骤是:采血后立即轻轻倒转采血试管4~5次混匀标本,等待标本充分凝固需要放置30min,离心半径200px,离心机离心速度维持在3500~4000r/min离心10min。血清与血凝块完全被分离胶分离,血清标本可直接上机检测或转移至仪器配套试杯中。具备这个条件才能制备出高品质血清标本,说明分离胶效果好。

bet36最新备用平台-bet36备用主页-bet360手机版  盐析后蛋白质沉淀经水溶后,特点是保持蛋白质生物学活性,因此,盐析法是研究蛋白质分子的结构和功能的最常用方法。除盐析法,有机溶剂沉淀法、等电点沉淀法、柱层析法和超速离心法等也是蛋白质分离的常用方法。

  实验器材和试剂

bet36最新备用平台-bet36备用主页-bet360手机版  1.器材:10ml具塞刻度试管、离心机、离心管、小试管、5ml吸管、滴管2支、培养皿3套、醋酸纤维薄膜、点样器、电泳槽、电泳仪、1.0×20cm层析柱。

  2.试剂:

  (1) 葡聚糖凝胶Sephadex G-25:称10g SephadexG-25,加200ml 0.02mol/L pH6.5磷酸盐缓冲液溶胀24小时。

bet36最新备用平台-bet36备用主页-bet360手机版  (2) 生理盐水:称取分析纯NaCl  0.89g,蒸馏水稀释至100ml。

bet36最新备用平台-bet36备用主页-bet360手机版  (3) 饱和硫酸铵溶液:25℃时称取(NH4)2SO4约767g,溶解至1000ml蒸馏水中,至不能完全溶解为止,即为饱和硫酸铵溶液。

bet36最新备用平台-bet36备用主页-bet360手机版  (4) 巴比妥缓冲液(pH 8.6):称取巴比妥钠15.458g.巴比妥2.768g,蒸馏水定容至1000m1。

  (5) 氨基黑10B染色液:称取氨基黑10B 0.5g,加入100ml漂洗液不断振摇,直到完全溶解。

bet36最新备用平台-bet36备用主页-bet360手机版  (6) 漂洗液:取95%乙醇450ml,冰醋酸100m1,混匀后,用蒸馏水稀释到l000ml。

  盐析沉淀蛋白质:

  取10 m1具塞刻度试管1支,加入血清溶液 2.5ml,缓慢加进等量饱和(NH4)2SO4溶液,充分摇匀,见有沉淀析出,静置10min,用双层滤纸过滤,弃去沉淀,取滤液。

  蛋白质分子能稳定存在于水溶液中是因为有两个稳定因素:水化膜和表面电荷。当维持蛋白质的稳定因素破坏时,蛋白质分子可相互聚集沉淀而析出,蛋白质分子沉淀析出的方法很多,根据对蛋白质稳定因素破坏的不同有中性盐析法、有机溶溶剂法、重金属盐法以及生物碱试剂法等。盐析法是以中性盐如硫酸铵((NH4)2SO4)等对蛋白质作用破坏蛋白质表面水化膜而使蛋白质相互聚集而析出。不同的蛋白质沉淀需要的中性盐浓度不同,在不同盐浓度下,蛋白质溶解度不同。球蛋白在半饱和状态下发生沉淀,而请蛋白在完全饱和状态下沉淀,利用此特性可把蛋白质分段沉淀下来,此种盐析法称分段盐析。

bet36最新备用平台-bet36备用主页-bet360手机版  此次实验注意事项:

  1、只有经过严格培训的人员才能进行离心机操作。

  2、操作时应戴手套以及眼睛和黏膜的保护装置。

  3、规范的实验操作技术可以避免或尽量减少喷溅和气溶胶的产生。血液和血清应当小心吸取,而不能倾倒。严禁用口吸液。

bet36最新备用平台-bet36备用主页-bet360手机版  4、移液管使用后应完全浸入适当的消毒液中。移液管应在消毒液中浸泡适当的时间,然后再丢弃或灭菌清洗后重复使用。

  5、带有血凝块等的废弃标本管,在加盖后应当放在适当的防漏容器内高压灭菌和/或焚烧。

  6、应备有适当的消毒剂来清洗喷溅和溢出标本。


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